T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL)說明書

更新時間：2023-10-24 點(diǎn)擊次數(shù)：551

T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL)說明書

產(chǎn)品詳情

T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌體DNA編碼的酶，對T7啟動子序列具有高度特異性。本酶是依賴于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化單鏈或雙鏈DNA T7啟動子下游NTP的摻入，合成與T7啟動子下游的模板DNA互補(bǔ)的RNA。

特點(diǎn)

該酶對T7啟動子具有高度特異性，不識別其它生物來源的啟動子?？梢宰R別修飾的核苷酸，例如生物素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、放射性同位素、地高xin標(biāo)記dNTP，用于各種標(biāo)記RNA的合成，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

來源：攜帶T7 RNA聚合酶基因的E. coli

分子量：99 kDa

純度：≥90%

比活：1 KU/μL

比活單位定義：在37℃、1小時內(nèi)使1 nmol的CMP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位

存儲緩沖液：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，20 mM β-ME，1 mM EDTA，50% 甘油，0.1% (w/v) Triton X-100， pH 7.9

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

質(zhì)量控制

1. SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶，毛細(xì)管電泳檢測純度在95%以上；

2. 酶動力學(xué)實(shí)時熒光法顯示無DNA酶及RNA酶污染。

應(yīng)用舉例

【RNA 體外轉(zhuǎn)錄合成】

1. 在RNase free的離心管中加入右側(cè)表格中各組分配制反應(yīng)體系；

2. 將上述反應(yīng)液混合均勻，低速離心至管底，37 ℃孵育4個小時。若轉(zhuǎn)錄本長度小于100 nt，增加反應(yīng)時間至4-8個小時；

3. 轉(zhuǎn)錄后取樣品進(jìn)行凝膠電泳，取樣1 μL稀釋到5 μL，然后用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測，以確定轉(zhuǎn)錄是否成功；

4. 反應(yīng)完成后，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA

組分	體積
DNase/RNase-Free Water	Up to 20 uL
ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM each)	2 uL each
10×Transcription Buffer	2 uL
DNA template	0.5 ~ 2 ug
RNase Inhibitor (40 U/u L)	0.5 uL
Inorganic Pyrophosphatase (0.1 U/uL)	0.5 uL
T7 RNA Polymerase (1 KU/uL)	0.2 ~ 1 uL
Mg 2+ (400 mM)	1 uL
Total Volume	20 uL

運(yùn)輸與保存

運(yùn)輸條件：藍(lán)冰/干冰運(yùn)輸

保存溫度：-20 ℃以下保存

避免反復(fù)凍融或頻繁暴露于溫度變化中，shou次使用時建議進(jìn)行分裝。

產(chǎn)品效期：12個月

注意事項

1. 使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20 ℃保存；

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

3. 產(chǎn)品僅供研究使用。

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